膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測方案

【膽固醇】作用

  膽固醇廣泛存在于動(dòng)物體內，尤以腦及神經(jīng)組織中豐富，在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也高。其溶解性與脂肪類(lèi)似，不溶于水，易溶于乙迷等溶劑。膽固醇是動(dòng)物組織細胞所*的重要物質(zhì)，它不僅參與形成細胞膜，而且是合成膽汁酸，維生素D以及甾體激素的原料。膽固醇經(jīng)代謝還能轉化為膽汁酸、類(lèi)固醇激素、7-脫氫膽固醇，并且7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線(xiàn)照射就會(huì )轉變?yōu)榫S生素D3，所以膽固醇并非是對人體有害的物質(zhì)。膽固醇還是臨床生化檢查的一個(gè)重要指標，在正常情況下，機體在肝臟中合成和從食物中攝取的膽固醇，將轉化為甾體激素或成為細胞膜的組分，并使血液中膽固醇的濃度保持恒定。當肝臟發(fā)生嚴重病變時(shí)，膽固醇濃度會(huì )降低。而在黃疸性梗阻和腎病綜合征患者體內，膽固醇濃度往往會(huì )升高。

膽固醇的高效液相色譜樣品處理過(guò)程

  精密稱(chēng)取膽固醇粉末0.05g(準確至0.1mg)，用無(wú)水乙醇溶解定容至50mL備用；再用無(wú)水乙醇稀釋至所需濃度。用0.45µm的有機系濾膜過(guò)濾，精密量取10µL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測方案色譜條件

色譜柱： C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm

流動(dòng)相:甲醇

波長(cháng)：205nm

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：10µL

柱溫：38℃

膽固醇的高效液相色譜HPLC檢測方案譜圖

高效液相色譜儀器配置

高壓輸液泵    0.001-9.999ml/min    1臺

紫外檢測器    190-700NM         1臺

手動(dòng)進(jìn)樣閥    含觸發(fā)開(kāi)關(guān)         1套

閥安裝支架                   1套

液相色譜柱    C18反相色譜柱       1支

微量進(jìn)樣器    100ul            1支

維護工具包    液相色譜啟動(dòng)工具  1套

色譜工作站    N2000或Clarify      1套

超聲清洗儀                   1套

真空抽濾裝置  帶真空泵           1套

分析天平      感量0.1mg         1 臺